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| 金霉素 |
药理毒理编辑本段回目录
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| 蛋白质 |
药代动力编辑本段回目录
适应症用编辑本段回目录
用法和用量编辑本段回目录
涂入眼睑内，每日1～2次。
鉴别编辑本段回目录
成分编辑本段回目录
检查编辑本段回目录
应符合眼膏剂项下有关的各项规定（附录Ⅰ G）。
含量测定编辑本段回目录
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| 乙醇 |
用法用量编辑本段回目录
洽于眼睑内，一日1-2次，最后一次宜在睡前使用。
不良反应编辑本段回目录
禁忌编辑本段回目录
注意事项编辑本段回目录
制剂/规格编辑本段回目录
眼膏：0.5%。
眼膏的妙用编辑本段回目录
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| 牛胰岛素 |
2、角膜炎角膜是指黑眼珠前面的一层透明薄膜，一旦发炎，应立即涂金霉素眼膏治疗。
3、偷针眼医学上称为麦粒肿，切勿用手挤压，以免造成严重并发症。在它尚未形成脓肿前，每日热敷3次，每次20分钟，然后涂金霉素眼膏，每日2～3次。
4、烂口角当口角出现糜烂时，一方面服用核黄素（维生素b2）治疗，另一方面用棉签蘸温开水洗涤伤口，揩干，再抹上金霉素眼膏，可较快愈合。
5、疖肿鼻粘膜有小结节胀痛时，可用药棉蘸取金霉素眼膏涂于鼻腔痛处，并轻压鼻子，促使它吸收。
6、干裂冬季有些人手足发生干裂现象，应先用热水洗净揩干，再涂上金霉素眼膏，用胶布固定，可较快愈合。
乙醇杂质含量测定编辑本段回目录
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| 眼结膜 |
盐酸金霉素在精制过程中需加入溶媒乙醇，残留乙醇的浓度若过高将对人体造成不同程度的损害，为了控制乙醇在盐酸金霉素中的含量，保证产品的安全可靠性，我们将盐酸金霉素中残留乙醇的含量≤0.5%作为内控标准。
仪器与试药
仪器日本岛津GC-14B气相色谱仪，江申色谱工作站;1ml，10μl进样器;
试药盐酸金霉素（福州抗生素集团有限公司，批号为20010530）;乙醇（AR）、异丙醇（AR）、去离子水;双蒸水。
色谱条件与系统适用性色谱柱2m×3mm的固定相为HayeSEPQ80～90目的不锈钢柱，柱温150℃;检测器:氢焰检测器;气化温度:180℃;载气:N2;压力:100kpa;进样量:1ul;乙醇、异丙醇的分离度R≥1.5;方法:内标法。
计算公式f=（Ai×dr）/（Ar×di）;Ms%=（f×As×di）/（Ai×W）;其中dr、di分别为乙醇、异丙醇的密度;Ar、Ai、As分别为标准乙醇、异丙醇、残留乙醇的峰面积，dr=0.7893，di=0.7855。
标准溶液与供试品溶液的制备
标准溶液的制备用1ml的吸量管分别准确吸取1ml乙醇和异丙醇放入盛有少量去离子水的1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液的制备
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| 靶细胞 |
在安瓿中，准确称取约50mg盐酸金霉素样品，用1ml注射器加入（3.2.1）所配制溶液1ml，快速将安瓿封口，置于水浴中，加热煮沸数分钟至样品完全溶解，取出并冷却。
方法学考察
最佳固定相选择使用15%PEG-2CM白色填料（60～80目）进行测试条件摸索，柱温60℃，样品没有响应信号，柱温升高虽有响应信号，但灵敏度太低，达不到色谱要求，无法测定微量溶媒。使用HayeSEPQ80～90目效果较好。。
定量限试验在（2.1）色谱条件下，基线稳定后，计算基线噪音水平;配制系列浓度梯度溶液进样，以响应峰高约10倍基线噪音的试液浓度为该方法定量限。在定量限浓度处，连续进样6次，计算响应峰面积的相对标准偏差。
表1响应峰面积的相对标准偏差
表2乙醇响应峰面积与浓度之间相关系数及线性范围
注:曲线方程为:Y=122271X-565.2
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| DNA |
精密度试验分别吸取（3.1）制备液1.0μl，分别进样6次，计算乙醇/异丙醇的RSD。
回收率试验分别准确吸取1μl，2μl，3μl，4μl，5μl的AR乙醇溶液，分别加入到已知浓度盐酸金霉素中测定其回收率。
结论
经过试验，使用HayeSEPQ80～90目测定微量溶媒灵敏度较高。本法操作简便，分析快速准确，重现性好，回收率高。
化学层析检验编辑本段回目录
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| 血浆蛋白 |
金霉素等半抗原（分子量<1000Da）的检测方法，通常采用酶联免疫吸附反应（ELISA）及高效液相色谱（HPLC）及气-质联用（GC-MS）等方法。然而，这些方法需要较长的实验时间及相应昂贵的实验设备，主要被限制在实验室中使用。随着人们对食品安全的日益重视和进出口贸易的高速增长，迫切需要一种能快速、稳定地检测农、兽药残留的方法。胶体金免疫层析试条因其使用方便已被广泛用于小分子物质的诊断检测，目前已经开发出用于链霉素、磺胺嘧啶等农、兽药残留检测的试纸条。本实验开发了一种快速检测金霉素残留的免疫层析试纸条，具有灵敏度高，操作快捷，不需要附加设备等优点，适用于加工企业对原辅材料验收，人员用药，成品分析以及养殖场对投入品的检测等工作。
1材料与方法
血清
1.1材料氯金酸（HauCl4·4H2O）、金霉素标准品、牛血清白蛋白（BSA）和聚乙二醇20000购于SIGMA公司；抗金霉素单克隆抗体（MAb），购于Biodesign公司（免疫原为KLH与金霉素的偶联物，鼠源性）；水溶性碳二亚胺（EDC）、金霉素琥珀酸钠盐，购于Fluka公司；羊抗鼠IgG购于北京鼎国生物技术有限公司；金霉素ELISA检测试剂盒购于EURO-DIOGNOSTICA公司；Bradford蛋白定量试剂盒购于Bio-Rad公司；BioJet XYZ3000型点膜仪购于美国BioDot公司；硝酸纤维素膜（NC）、胶体金结合垫、样品垫、吸水垫购于Millipore公司。
1.2胶体金的制备及抗金霉素Mab的金标记胶体金颗粒的大小平均为30nm，参照文献制备胶体金颗粒，在100ml去离子水中加入1%柠檬酸三钠1ml，煮佛后迅速加入1%氯金酸1ml，继续煮佛10min，冷却后，4℃下保存备用。
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| 甲醇 |
1.3样品制备金霉素标准样品配制以甲醇配成100μg/ml标准贮液，后以超纯水稀释成各浓度梯度。
肉类样品预处理取10g均质过的试样，加入10mlPBS，37℃混合保温90 min后，3000r/min离心20 min，收集上清液备用。
牛奶样品预处理取5ml新鲜牛奶，放入离心管中，10℃3500r/m离心10 min，吸除上层的脂肪层，取去脂牛奶用PBS适当稀释后备用。
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| 脂肪组织 |
部分实际待测试样的处理方法参考荷兰EURO-DIAGNOSTICA金霉素检测试剂盒产品试样处理方法。
1.4金霉素全抗原的合成包被抗原为金霉素与BSA的偶联物（CAP-BSA），其合成方法为活性酯法及叠氮法，参见文献，其中活性酯法为：先将20mg氯毒素琥珀酸盐、15mgEDC及30mgBSA混合溶于1ml Tris缓冲液中，0~4℃下避光搅拌1h，再加入5mgEDC，在0℃下搅拌反应12h，静置过夜后，后用Tris缓冲液透析3d。
将合成的CAP-BSA全抗原稀释成100μg/ml（蛋白浓度），后做200~300nm波长的紫外扫描，参照杨利国介绍的计算方法测算偶联比，即CAP与载体蛋白BSA的摩尔比。其中BSA浓度以BRADFORD蛋白定量试测定。
用EURO-DIOGNOSTICA公司的ILISA试剂盒检测金霉素浓度，操作方法参见产品说明书。在450nm波长处测A值，计算抑制率：
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| 扁桃体 |
B0为不含待测试样中金霉素的吸光值，B为含待测试样中金霉素吸光值。
1.5试纸条组装用点膜机把适当浓度的CAP-BSA及羊抗鼠IgG喷在NC膜上，分别作为检测线（T）和控制线（C），在37℃烘箱干燥8h。以同样方法，将制备好的金标记CAP单克隆抗体包被在胶体金结合垫上。
试纸条组成为一个PVC背板，在其上按顺序粘上样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。用带MARK胶带绕背板覆盖在样品垫、胶体金结合垫及吸水垫上。用切割机将贴好的板切割成3mm宽的条，放入带干燥剂的铝箔袋中密闭储存。
1.6检测方法将CAP检测试纸条带MARK线的一端插入装有待测试样的容器中，使试样溶液沿膜从下往上移动。5min以后，即可判读结果。
结果与讨论
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| 毛细血管 |
2.2CAP-BSA人工抗原合成本试纸条检测线所用的包被抗原为CAP-BSA偶联物，由本实验室人工合成。偶联反应后所得产物经紫外光谱分析，参照文献所介绍的方法计算其偶联比率。多次实验所得抗原的偶联比率在1：10~40左右，部分数据见表1。由表1可以看出，BSA与CAP偶联后最大吸收峰都发生蓝移，可能是其分子结构发生变化及环境极性增大的原因。对金霉素与BSA的偶联是否成功，还采用竞争抑制ELISA检测来判断。按梯度稀CAP-BSA偶联物，后由CAP-BSA与CAP标准品竞争结合金霉素抗体。
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| 念珠菌 |
本实验还对CAP抗原的合成方法采用了活性酯法与叠氮法，并比较其对T线的影响。由于叠氮法合成的叠氮化合物为淡黄色物质，干扰T线显色，因此不适用作为检测线的包被抗原。而活性酯法合成的偶联物CAP-BSA1~3，以相同的BSA浓度包被T线，控制线都能与金标记的CAP抗体反应出现明显的红色线条，适合做包被抗原。并发现其不同结合比对检测的灵敏度有一定影响，见试纸条的调试部分。
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| 球蛋白 |
调试结果表明采用不同pH值5、6、7、8、9、10的样品垫对试剂条的灵敏度没有产生明显影响。将硝酸纤维素膜用各种不同配比的溶液做封闭，发现试剂条的C、T线显色都变浅，但对灵敏度和特异性没有明显影响，所以最终制备试剂条时没有采用封闭的方案。经过比较发现，用同样的C、T线浓度、抗体-胶体金复合物A值和同样的包被量，采用12μm和5μm这两种不同比例的蔗糖和海藻糖，会对胶体金复合物从胶体金结合垫上的释放能力产生影响，在一定范围内，加入的蔗糖和海藻糖的比例越高，胶体金复合物释放得越快。
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| 头孢唑肟 |
本试纸条金霉素的最低检测水平（LDL）的判断标准是当检测线比控制线的颜色明显淡时，试样中金霉素的含量为1mg/ml。当试样中的CAP浓度大于5ng/ml时，检测线完全消失；当CAP浓度小于0.5ng/ml时，检测线与控制线在肉眼下没有明显区别。本试纸条的LDL可达到1ng/ml。检测限如再降低，容易出现假阴（阳）性的结果。由于其使用主要是在生产场所现场大批量初筛时定性检测，此灵敏度可以满足实际的筛选需要，如需可靠的定量结果还需在实验室里做ELISA、HPLC等进一步检测。
2.5检测的特异性将金霉素琥珀酸钠，甲砜霉素，磺胺二甲基嘧啶，四环素，青霉素，链霉素6种抗菌素溶于PBS（pH7.4，0.01mol/L），配成不同浓度，然后用试纸条检测。结果如图3所示，金霉素琥珀酸钠及金霉素在低浓度下即不出现红色T线。而后5者（类似物）即使在浓度大于100ng/ml时，也能见明显的T线，可见与不同抗菌素的交叉反应很低（因定性检测不能给出交叉率的确切数值）。由于T线包被抗原是以琥珀金霉素钠盐偶联BSA而成，因此金霉素琥珀酸钠与金霉素的这种交叉反应是在意料之中的。因此免疫层析试纸条可以通过观察试纸条上检测线的有无及颜色变化进行定性检测，对金霉素具有较高的特异性。
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| 青霉素 |
利用该试纸条对含不同浓度金霉素残留的虾肉提取液试样进行检测并与ELISA的检测结果比较，总共检测50份（阳性30份，阴性20）。试纸条以1ng/ml为判断限值，没有出现假阳性及假阴性，检测结果与ELISA结果完全相符。如把检测限值再降低则易出现假阳性的结果，不能达到试纸条检测稳定性的要求。
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| 万古霉素 |
生产企业编辑本段回目录
江西萍乡制药厂、福建省福抗药业股份有限公司、安徽省合肥第二制药厂、西安康华制药厂、新疆冠林制药有限公司、重庆科瑞制药有限公司、柳州市制药厂、深圳长白山制药厂实业有限公司、广州何济公制药有限公司、信阳地区江淮制药有限公司、河南省信阳制药厂、武汉第三制药厂、安徽省泗州孟仁寿眼药厂、古田县抗生素有限公司、芜湖三益制药有限公司、南通生物化学制药厂、昆山信成生物制药有限公司、南京白敬宇制药厂、上海申光制药厂、南通宝康制药有限公司、河北阔达生物制品股份有限公司、东北制药集团沈阳红旗制药厂、唐山市红星制药厂。
参考资料编辑本段回目录
1、中国医学药典 第二部。
2、金霉素眼膏使用说明书。
3、安登魁.药物分析，第2版.北京:人民卫生出版社，1986，128。
4、安登魁.现代药物分析选，北京:医药科技出版社，2001，168。
